肠道类器官作为一种高度模拟真实肠道结构与功能的体外模型，已成为研究肠道生理、病理和疾病机制的重要工具。在培养小鼠肠道类器官的过程中，需要精确控制培养条件及细胞因子的添加，而不同阶段所需的细胞因子亦各不相同。

一、初始培养阶段

在初始培养阶段（干细胞增殖），所用培养基为基础培养基（如DMEM/F-12）。此阶段所需的生长因子包括：

• Wnt-3a：激活Wnt信号通路，维持干细胞的自我更新。
• R-spondin-1：增强Wnt信号，促进干细胞增殖。
• EGF（表皮生长因子）：促进细胞增殖。

同时，抑制因子如Noggin也需添加，以抑制BMP信号并维持干细胞的未分化状态。

二、分化诱导阶段

在分化诱导阶段，继续使用基础培养基DMEM/F-12。此阶段需要引入以下因素：

• ActivinA和FGF2：在分化初期分别加入，促进定形内胚层的形成。
• IL-22：在分化中期加入，以促进潘氏细胞的分化。
• CHIR99021（GSK3β抑制剂）：用于调控Wnt信号通路，促进细胞分化。

在此阶段，可以适当减少某些增殖因子的浓度，如降低EGF，以避免过度刺激细胞增殖。

三、维持与长期培养阶段

类器官分化完成后，进入维持与长期培养阶段，此时的培养基调整主要旨在维持类器官的稳定性与功能。基础培养基继续使用适合的培养基，而维持因子需根据需要调整Wnt信号通路的活性，例如适当调整Wnt-3a和Noggin的浓度。此时还需逐渐去除ActivinA和FGF2等分化诱导因子。

四、注意事项

在培养过程中需注意以下几点：

• 培养基更换频率：通常每2-3天更换一次，以确保营养成分的充分和代谢废物的清除。
• 监测类器官状态：定期观察类器官的形态与生长状态，并及时调整培养条件。
• 无菌操作：整个过程需严格遵守无菌操作规范，以避免污染。

通过上述阶段性的培养基调整，可以有效诱导小鼠肠道类器官的成功分化，并维持其长期稳定培养。南宫28不仅提供上述小鼠肠道类器官培养所需的基础培养基和细胞因子，还提供了现成的小鼠肠道类器官培养基套装3DCultrIntestinalOrganoidGrowthMedium(Mouse)。该产品便于使用、操作简单，为您的科研之路提供了强有力的支持，尽显南宫28的专业与便利。