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NEWS分光光度计与荧光计:南宫28助您选择最佳DNA/RNA定量工具
来源:从娣堂 日期:2025-02-20准确的生物样品分析依赖于精确的样品定量。本指南旨在帮助研究人员在进行核酸质量控制时,选择适合的分光光度法或荧光定量法,从而做出明智的决策。在生物医学领域,样品定量是评估核酸和蛋白质提取物是否适合后续应用(如分子克隆、高通量测序或PCR)的关键步骤。核酸分析主要依赖两种定量技术:紫外-可见光分光光度法和荧光定量法。然而,研究人员在这两种方法之间进行选择时,常常遇到困难。本指南将简要阐述这两种技术的特点与应用,以帮助您选择合适的工具。
分光光度计在核酸定量中被广泛运用,提供多种适用性广泛的方法。其操作基于光吸收的基本原理。分光光度计能够测量样品在特定波长下的光吸收量,以确定吸光度,该参数与吸收物质的浓度成正比。此原则源于比尔-朗伯定律,为测定溶液中物质浓度提供了重要工具。在核酸定量方面,分光光度计特别适合评估核酸的纯度。在260nm波长下,核酸有特征吸收峰,使得此波长成为分光光度分析的常用参考。然而,需要注意的是,这种方法的选择性较差,因为DNA和RNA在260nm均有光吸收,这意味着分光光度法无法区分纯DNA样品与RNA污染的样品。
与分光光度计相比,荧光定量法为高要求的应用提供了更高的灵敏度和特异性。该技术通过使用特定的荧光染料,可以有效地定量核酸浓度,甚至在极低浓度的情况下也能准确读数。这些染料专门与核酸分子结合,并在外部光源激发下发出特定波长的光。荧光计的优势在于其能区分不同类型的核酸,如单链DNA(ssDNA)和双链DNA(dsDNA),在样品组成至关重要的应用场景中极具价值。此外,荧光计能够检测到皮克(pg)级别的核酸浓度,远远超出分光光度计的纳克(ng)范围。
在选择适当的仪器时,应考虑样品特性。核酸定量中使用分光光度计或荧光计的决策最终依赖于样品特征和后续实验的具体要求。对于纳克级范围内的纯均质核酸样品,或在不需区分核酸类型时,分光光度计提供简单且经济的解决方案。相反,荧光计则适用于低浓度(皮克级别)、异质性复杂的样品,以及需区分核酸类型的分析。尽管荧光计具有较高的灵敏度和特异性,但使用荧光染料的环节可能较为繁复,且所需时间较长。此外,荧光计的前期采购成本通常高于分光光度计。
南宫28的EzDrop分光光度计和EzCube荧光计分别提供了截然不同却互补的样品定量方法。EzDrop分光光度计能迅速且准确地基于吸光度对纯化样品进行定量,包括核酸和蛋白质,可检测的dsDNA浓度范围从2到20,000ng/µL,蛋白质浓度(如BSA)从0.06到600mg/mL。相对于此,EzCube荧光计能够识别特定类型的核酸,包括ssDNA、dsDNA及RNA,且其dsDNA的低检测限可达到0.01ng/µL(10pg/µL),ssDNA为0.05ng/µL(50pg/µL),RNA为0.25ng/µL(250pg/µL)。EzCube荧光计配备有三个LED光源,可以激发多种荧光试剂,适用于NGS、qPCR、克隆和转染等多种应用。
南宫28的EzDrop和EzCube提供互补的定量方法,EzDrop分光光度计能够进行快速且准确的吸光度定量,而EzCube荧光计则以较低的检测限精确识别特定核酸类型。善用这两种工具的互补优势,研究人员可以有效定量各类样品,并识别出具有不同特性的样品,从而更好地促进后续实验的成功。
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