南宫28人前列腺癌细胞VCAP培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人前列腺癌细胞VCAP

生长特性：贴壁

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：DMEM(含NaHCO3 15g/L) + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：第一次建议1:2传代，传代情况2天换液。

备注：用无菌离心管收集瓶中培养基，留作过渡对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买南宫28完全培养基。

二、细胞收到后处理

细胞状态良好时，灌满完全培养液并密封瓶口为最佳运输方式。收到细胞后，请使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，再放入超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶置入37℃、5% CO2 培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（推荐拍摄40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，如未提供照片，默认收到状态良好。

（传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后需将瓶盖稍微拧松。）

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，请将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5 ml完全培养基并放入37℃、5% CO2培养箱中培养；如果细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2 ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况。如果细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲培养瓶后加入5 ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15 ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2 ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8 ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1 ml至培养瓶中，观察细胞，待细胞回缩变圆后加入5 ml完全培养液终止消化，然后轻轻吹打细胞使之脱落，将悬液转移至15 ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀的细胞加入1 ml的南宫28无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如需最终转入液氮罐中，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐中。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，直至管中无结晶，随后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5 ml完全培养基的15 ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀用5 ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱培养。
4. 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能贴壁不牢，在运输过程中易发生细胞脱落，这属正常现象。如脱离较多，请将培养瓶中的培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清以作过渡培养。沉淀部分加入胰酶1-2 ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加入5 ml完全培养基终止反应。再离心，弃去上清，补充1-2 ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8 ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）可重发的情况及判定标准

1. 运输过程中遭遇的各种问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，可重发。
2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后即可重发。
3. 常温发货的细胞静置24小时后及干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，若绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发。
4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时后未开封出现污染，亦可重发。
5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，并核实后予以重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天请拍照，若3天内未告知，则视为产品合格。若在4-7天内出现问题需提供收到细胞前3天照片及操作详细步骤，与技术人员沟通后，由技术人员判断是否为我方责任，若为我方责任将重发。

2）不予重发的情况

1. 客户造成的细胞污染，无法重发。
2. 客户不正确操作导致细胞状态不佳，无法重发。
3. 非本库推荐培养体系导致细胞状态不佳，无法重发。
4. 细胞状态不佳且未提供前期三天照片的，无法重发。
5. 在细胞培养中进行过其他处理的，无法重发。
6. 收到细胞后2天内未告知的，无法重发。
7. 具体情况将视实际情况而定。

以上内容为南宫28已优化的VCAP细胞培养说明，请遵循相关步骤以确保细胞的健康生长与繁殖。