南宫28细胞培养条件包括使用DMEM培养基，配以10% FBS和1% P/S。在温度方面，建议在37℃下进行培养。首次传代时，推荐采用1:2的比例进行细胞传代。每隔两天需更换培养液。为了确保细胞运输的最佳状态，建议同时购买相关培补品并采取合理的处理方法，将细胞培养至良好状态后灌装满完全培养液并封好瓶口。

细胞处理步骤如下：在收到细胞后，采用75%酒精喷雾消毒整个细胞瓶，并在超净工作台内严格执行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以确保细胞的状态稳定后再进行后续处理。可通过显微镜检查细胞的生长情况，并进行多倍数的拍照保存（建议分别拍摄40x、100x和200x的图片），前三天的照片是售后服务的重要依据。如不提供照片则默认收到的细胞状态良好。

细胞传代步骤

对于贴壁细胞传代：若细胞汇合度未超过80%，则需将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基后继续培养。若细胞密度超过80%，则可进行传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞的消化情况，若细胞变圆并开始脱落，迅速回到工作台，轻轻敲击培养瓶后，加入5ml完全培养基以终止消化。
3. 使用吸管轻轻吹打细胞，让其完全脱落，然后将悬液转移至15ml离心管，1000rpm离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液按1:2比例分装至新培养瓶中，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞传代步骤

对于悬浮细胞，可采取半换液法或离心换液法：

1. 半换液法：培养瓶竖放在培养箱中静置1小时，轻轻吸去约3ml培养基，补充3ml的完全培养基。若培养基变色缓慢，可加入约500µl的FBS。在后续传代时可直接补给5ml培养基，通常在经过三次这样的传代后进行离心传代，以去除死细胞。
2. 离心换液法：如需分瓶，可将细胞悬液收集于离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清后补加1-2ml培养基重悬混匀，再按照1:2的比例分至新T25瓶中，添加6-8ml新鲜完全培养基，以维持细胞的生长活力。

细胞冻存步骤

细胞达到覆盖培养瓶的80%面积时，按以下步骤进行冻存：

1. 弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的南宫28无血清冻存液（货号：C7001），混匀并放入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中。如后期需将细胞转入液氮罐中，需在-80℃冰箱中存放超过24小时。

细胞复苏步骤

从液氮中取出细胞冻存管，快速放置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，外壁用75%酒精擦拭。将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清，使用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。第二天及时更换新鲜完全培养基以维持细胞活性。

注意事项

部分细胞在运输过程中可能会出现细胞脱落现象，此为正常情况。若发现细胞脱落较多，应将培养瓶中的培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟后，处理上清以进行过渡培养。沉淀中加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后加5ml完全培养基终止反应，再离心、弃去上清，并用1-2ml完全培养基重悬。最后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中进行培养。