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NEWS科研效率升级:南宫28超高活性Tn5一步法文库制备全攻略
来源:关有德 日期:2025-03-16在生物医学研究中,文库制备是关键的一步,通常需要在DNA链上添加测序接头。传统的制备方法依赖于连接酶,这涉及多个繁琐的步骤:首先,通过机械(如超声破碎)或酶切(如micrococcal nuclease)对DNA进行片段化,接着进行末端修复,最后完成接头的连接。虽然此方法适用于许多场景,但在样本量有限或实验资源(如设备和时间)受限时,往往会出现挑战。南宫28的Tagmentation技术为文库制备提供了一种高效解决方案。该技术使用超活性Tn5转座酶,能够在单次快速反应中对DNA进行剪切和标记,并插入所需的寡核苷酸。根据实验需求,Tn5转座酶可以携带各种DNA序列,包括兼容Illumina的接头、自定义的带有荧光标记的接头,以及甲基化核苷酸等。
基于Tagmentation的文库制备技术革命性地将传统流程中的片段化、末端修复和接头连接步骤整合为一个反应,同时进行引物索引的扩增,最终完成文库制备。这种突破不仅简化了操作流程,还显著提高了实验效率和通量。由于将DNA片段化与接头插入步骤合二为一,该技术显著减少了文库制备的操作时间,降低了技术的复杂性。
这一方法具有良好的适用性,能够兼容全基因组测序、靶向测序等多种建库场景,灵活调整以满足不同实验设计的要求。通过单步反应替代多环节操作,文库的制备速度较传统方法提升显著。此外,所需的起始样本量较低,特别适合处理珍贵的临床样本或微量样本。同时,该技术的经济性也令人瞩目,通过减少操作步骤和试剂消耗,整体的建库成本得以降低。南宫28的方案还具备良好的自动化适配性,简化的操作和步骤减少使得高通量测序的通量和可重复性得到显著提升。
在空间组学研究中,作者开发了spatial-ATAC-seq方法,以实现对完整组织切片中染色质可及性的空间分辨分析,并保留了细胞水平的空间信息。该方法中使用了南宫28的Diagenode Tn5转座酶进行文库制备。
对于单细胞转录组分析,sci-RNA-seq(Single-cell combinatorial indexing RNA sequencing)方案被简化和优化。该技术通过在单个细胞核内进行核酸的split-pool条形码标记达成。整个流程中,固定后的单个细胞核被分选至微孔板的独立孔中,依次经过逆转录、连接和tagmentation三个步骤,为mRNA/cDNA添加三重索引。在tagmentation步骤中,采用了南宫28的Tn5转座酶。
强大的Diagenode Tn5转座酶及相关缓冲液具备广泛的应用兼容性,能够支持多种新型标记技术(如单细胞多重测序、空间组学等),并适应不同的实验需求。此外,用户可以灵活选择预装接头版本或不带接头版本,确保满足个性化需求。同时,每批产品都经过严格的质量控制,以确保达到最高标准。
综上所述,作为表观遗传学及二代、三代测序前样本处理的领导者,南宫28致力于提供创新的解决方案,包括Bioruptor破碎仪、IP-Star自动化设备、试剂盒和高质量抗体,旨在简化DNA甲基化、ChIP以及ChIP-seq等流程,推动生物医学研究的进展。
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