背景介绍

裸露的RNA是带负电荷的亲水性大分子，由于细胞膜的静电排斥，RNA难以穿透细胞，且易受到广泛存在的RNA酶的快速降解，因此需要一个保护性外壳来确保其顺利进入细胞。细胞膜主要由脂质构成，通过脂质囊泡包裹RNA，以跨越细胞膜并将RNA释放到细胞质中。这种囊泡需呈正电，以便与带负电的RNA结合。然而，永jiu性阳离子脂质组成的囊泡可能与负电的细胞膜产生静电相互作用，导致细胞毒性。因此，脂质的结构需要能够对内体的酸性环境作出响应，使其带有正电荷。

脂质纳米粒结构

脂质纳米粒（LNP）通常由四种关键成分组成：可离子化的阳离子脂质、磷脂（两性离子脂质）、胆固醇和PEG化脂质。这些成分协同作用，确保有效的RNA递送。

脂质纳米粒递送机制

作为mRNA的递送系统，LNP的作用机制包括多个步骤，以确保mRNA安全有效地送达目标细胞并被表达。在LNP中，可电离的阳离子脂质起着关键作用，它在自组装成LNP过程中吸附带负电荷的RNA，并在中性pH条件下保持不带电，以降低毒性。同时，在细胞吸收后，随着内体pH的降低，它能再次带上正电荷，促进内体逃逸。胆固醇和PEG脂质的变体已经被证明能够调节LNP的物理特性、纳米结构及其最终效果。两性离子磷脂通常被称为“辅助脂质”，在保护mRNA、促进细胞内传递以及激活免疫反应方面扮演着至关重要的角色。

LNP转染实验步骤

以下是6孔板单孔参考条件的转染步骤，其他培养形式请参考表1：

1. mRNA预混液制备：将25µg mRNA（浓度为1µg/µL）与60µL Buffer混合。
2. mRNA-easyLNP复合物：将625µL mRNA预混液与625µL easyLNP纳米混悬液混合，轻轻摇涡2-3秒混匀。
3. 加入细胞：将125µL mRNA-easyLNP复合物加入细胞，轻轻晃动使其均匀分散。
4. 分析时间：经过24-48小时的培养后进行分析。

表1 mRNA转染指南：根据每孔使用的细胞培养容器，详细步骤如表中所示。

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