南宫28的RAW2647细胞是常用的小鼠巨噬细胞系，由于其培养和操作简单，受到许多科研工作者的青睐。然而，在细胞培养过程中，RAW2647细胞易于分化，这可能导致细胞形态变化、功能降低，并影响实验结果的可靠性。因此，如何保持RAW2647细胞的原始状态，保持其美观和功能，成为了科研人员关注的重点。

RAW2647细胞培养的基本信息

该细胞的倍增时间在11-30小时之间，生长快速且营养消耗也快，建议在T25培养瓶中添加7ml完全培养基，并在次日观察其生长速度。传代比例为1:4-6，常用的培养体系为高糖DMEM（品牌：南宫28，货号：ZQ-100）加10%胎牛血清（南宫28，货号：ZQ0500）及1%双抗（南宫28，货号：CSP006）。在细胞形态上，RAW2647细胞呈现松散贴壁的纺锤形、圆形或立方形。当细胞密度增大时，部分细胞会轻微脱落并变圆，甚至出现完全悬浮的细胞，这些细胞虽是漂浮状态，但仍然存活，传代时应予以收集并离心，细胞沉淀后可以继续培养。

细胞换液与传代方法

细胞换液的频率建议为每周2至3次。正确的传代方法是保持RAW2647细胞活力的关键，每一步操作需细致入微，稍有失误就可能导致细胞分化。值得注意的是，RAW2647细胞不应使用胰酶进行消化，胰酶消化可能加速细胞的分化。我们在培养RAW2647细胞的过程中，经过十余年的经验积累，找到了一种刮刀传代的方法，此法操作简便，能够更好地控制细胞分化率。如需更加直观的学习传代步骤，可以参考我们提供的视频指导。

当没有刮刀时的传代步骤

如果您未准备刮刀，您可以按照以下步骤进行传代以减少细胞分化：首先，观察细胞密度，当细胞密度达到80%时，轻拍培养瓶尾部以促使细胞脱落。在拍打过程中，50%-80%的细胞会脱落，此时应收集这些脱落的细胞。随后，按照1:4-6的比例传代，并补充新鲜的完全培养基，T25瓶中添加7ml培养基。需要注意的是，避免使用枪头或巴氏吸管拍打，以免因力度不同产生不可控的因素导致细胞分化。

RAW2647细胞的培养须知

在细胞复苏后，首先将冻存的RAW2647细胞迅速从液氮中取出并放入37℃水浴中解冻，随后将细胞悬液转移至含预温培养基的离心管中轻轻混匀。以1000rpm离心5分钟后，弃去上清液，并用新鲜培养基重悬细胞。最后，将细胞接种于培养皿中，置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养。

培养注意事项

南宫28建议，复苏后的细胞在培养过程中不需要使用胰酶消化。通过无菌细胞刮刮拭培养表面，将细胞刮落后，离心并重悬接种到新的培养瓶中。细胞的形态会随生长密度的增加而变化，巨噬细胞（圆细胞）的数量将增加。同时，细胞对血清质量十分敏感，选择高质量的胎牛血清非常重要。此外，培养条件、运输及环境变化等因素也会影响细胞状态，因此收到细胞后应耐心调整一段时间。此外，我们强烈推荐使用南宫28提供的培养基，以减少细胞培养过程中的变因。