在生物医疗领域中，ELISA定性测定的结果判断是一项基础且重要的工作，其目的是确定受检样本中是否存在待测抗原或抗体，其结果以“阳性”或“阴性”来表示。“阳性”意味着在该测定系统中样本与试剂发生反应，而“阴性”则表示无反应。此外，利用定性判断方法也可以进行半定量结果的评估，以滴度表示反应强度，然而其本质依然是定性试验。在这种半定量测定中，标本经过一系列稀释后进行测试，呈阳性反应的稀释度即为滴度。通过滴度的高低，可以有效地判断样本的反应性强弱，这种方法相较于单纯观察不稀释样本的颜色深浅，更具定量意义。

在间接法和夹心法的ELISA中，阳性孔的显色通常比阴性孔更深。而在竞争法ELISA中，则相反，阴性孔的颜色深度通常超过阳性孔。目前，针对这两种类型的反应结果判断方法有所不同，具体如下所述。

1. 间接法和夹心法

这类反应的定性结果可以通过肉眼观察来判断。对无色或接近无色的样本判定为阴性，而明显显色的样本则为阳性。但在ELISA的实验中，正常人血清反应后会出现一定的本底色，这个本底的深度因试剂的成分和实验条件的不同而有所变化，因此实验过程中必须加入阴性对照。阴性对照应为不含受检物质的正常血清或相似物质。

在通过肉眼判断结果时，建议用显色深于阴性对照作为标本阳性的指示。虽然目视法操作简便，但主观性较强。当条件允许时，使用比色计测定吸光值，能够获得更客观的数据。首先读取样本（S）、阳性对照（P）和阴性对照（N）的吸光值，然后进行计算。计算方法主要可以分为阳性判定值法和标本与阴性对照比值法两类。

a. 阳性判定值法

阳性判定值（cut-off value）通常是阴性对照A值加上一个特定常数，此值成为判断结果阳性或阴性的标准。此法要求实验条件极其恒定，试剂的制备需标准化，而且阳性和阴性对照品应符合一定的规格，并须配备相应的仪器，严格按照操作规定进行。阳性判定值公式中的常数是通过对大量样本实验检测获得的。例如，某款检测HBsAg的试剂盒中，阴性对照品为不含HBsAg的复钙人血浆，阳性对照品的HBsAg含量为P=9±2ng/ml。每次实验设置两个阳性对照和三个阴性对照，测得A值后，计算阴性对照A值的平均数（NCX）和阳性对照A值的平均数（PCX），两个平均数的差（P-N）必须大于特定数值（如0.400），试验才有效。

b. 标本/阴性对照比值

在实验条件较难保持恒定的情况下，采用样本与阴性对照的比值判断法更加合适。在得到样本（S）和阴性对照（N）的A值后，计算S/N值。这里的P并不代表阳性（positive），而是病人的缩写，为避免混淆，建议使用S/N表示。在早期的间接法ELISA中，一些作者设定S/N值为阳性标准。目前，多数测定依然沿用这一标准。每个测定系统应根据实验确定各自的S/N阈值。

2. 竞争法

在竞争法ELISA中，阴性孔的显色深度通常超过阳性孔。阴性显色的强度取决于反应中酶结合物浓度及加入竞争抑制剂的量，一般需将阴性对照的吸光度调节在10-15之间，以提高实验的敏感性。竞争法ELISA不易通过肉眼判断结果，因肉眼很难辨别弱阳性与阴性对照的显色差异，通常需要使用比色计测定S、P和N的吸光值。

其计算方法主要也有两种，即阳性判定值法和抑制率法。

a. 阳性判定值法

此方法在竞争法中与间接法和夹心法的阳性判定值法基本相同，但计算公式中引入阳性对照的A值。以某检测抗HBc的试剂盒为例，其阴性对照为不含抗HBc的复钙人血浆，阳性对照中抗HBc的含量为125±100u/ml。每次实验设置两个阳性对照和三个阴性对照，同样地，需计算出阴性对照A值的平均值（NCX）和阳性对照A值的平均数（PCX），确保两个平均数的差（N-P）大于特定数值（例如0.300），试验方可有效。

b. 抑制率法

抑制率表明样本在竞争结合中对阴性反应显色的抑制程度，计算方式为：抑制率（%）=（阴性对照A值 - 样本A值）/阴性对照A值。一般规定抑制率≥50%为阳性，<50%为阴性。这种方法在生物医疗的检测中得到广泛应用，尤其是在南宫28品牌推出的创新试剂中，具有更高的准确性和可靠性。