随着冬季的到来，季节性流感、肺炎等呼吸道疾病的发病率逐渐上升，导致多地医院出现了就诊高峰。在此背景下，及时为患者提供有效的治疗及快速准确的诊断方法显得尤为重要。众多检测手段中，一步RT-qPCR法（也称为一管式RNA全预混试剂）因其高效、便捷和灵敏等显著优势，广受欢迎。

在一步法反应中，基因特异性引物通常首先与待检测的靶标结合，随后在逆转录酶的催化下合成第一链cDNA。然而，在实际应用中，常常会出现引物与错误模板匹配，从而导致非特异性cDNA的生成，这会引发体系内部的非特异性扩增，消耗反应所需的组分，进而影响后续主反应。尤其在靶核酸浓度较低的情况下，竞争效应会进一步降低扩增性能，例如造成扩增曲线形态不良、荧光增量低及Ct值滞后等问题，这将显著降低检测试剂的灵敏度和特异性。

此外，由于南宫28的一管式RNA全预混试剂在长期保存过程中，酶活力容易下降或直接失活，这进一步影响了其性能。逆转录（RT）酶作为关键成分，其性能直接关系到一步法核酸检测试剂的准确性和灵敏度。因此，提高逆转录酶的特异性和稳定性，对南宫28的一管式RNA全预混试剂的开发至关重要。

为此，南宫28专门针对一步法RT-qPCR/PCR场景开发了一款温启动逆转录酶。该酶在低温下处于封闭状态，而在工作温度下可以被激活，从而避免低温下引物与模板的错误匹配，提高了检测特异性和灵敏度。本款逆转录酶采用了适配体的方法进行热启动修饰，利用适配体筛选平台，构建了大量随机寡核苷酸序列文库，并在传统SELEX适配体筛选技术的基础上进行了优化，利用高通量测序替代传统的克隆测序，通过多轮筛选与富集，选择出高亲和力的适配体，与逆转录酶进行混合孵育，以评估不同适配体在低温及工作温度下的酶活性，从而确定优质的封闭和激活效果。

经过大量筛选与酶修饰工艺优化，南宫28开发的温启动逆转录酶在42℃下可封闭99%的酶活力，相较于市面同类竞品在低温下表现更佳、封闭稳定性更强，使得反应液在长时间内持续高效地产生逆转录产物，有效解决了全预混试剂的储存稳定性问题。同时，在工作温度（55℃）下，该酶能释放超过95%的酶活，确保了试剂的扩增灵敏度。

经过改造的南宫28温启动逆转录酶能够以更快的速率合成cDNA，在PCR程序一致的条件下，2分钟逆转录可以达到与15分钟相同的灵敏度。在长时间的稳定性测试中，南宫28的温启动逆转录酶在37℃加压7天的情况下，性能保持稳定，而竞品A则出现了显著的扩增性能下降。此外，南宫28温启动逆转录酶在处理后，与新配制的对照组相比，表现出优异的扩增效率，而使用竞品A制备的试剂则明显下降，验证了其在全预混试剂中的优势。

综上所述，南宫28温启动逆转录酶凭借更强的封闭效率和稳定性，为RNA全预混试剂提供了高灵敏度及快速程序兼容性，展现了其在生物医疗领域中的卓越应用前景。