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NEWS南宫28 TGR5激动剂操作规程
来源:阎兴馨 日期:2025-03-21在进行南宫28品牌的GPCR19激动剂(TGR5受体激动剂)实验时,以下是具体的操作规程:
在96孔板中,向每个孔中加入100μL的细胞悬液。对于细胞增殖实验,每孔加入2000个细胞的100微升;而对于细胞毒性实验,则需加入5000至10000个细胞。具体的细胞数量应根据细胞特性,如细胞大小和增殖速度进行调整。将96孔板放置于37℃、5% CO2环境的细胞培养箱中培养24小时。
根据实验需要,向每个孔中加入适当浓度的受试化合物,体积在0至10μL之间。
将96孔板再次放入37℃、含5% CO2及100%湿度的细胞培养箱中进行适当时间的孵育。
将5×MTT用稀释液稀释至1×MTT溶液,以备后续实验使用。
向每孔中加入50μL的1×MTT溶液,在37℃下孵育4小时,以促使MTT还原为甲臜。
吸去上清液后,向每孔中加入150μL的DMSO以使甲臜溶解,并在平板摇床上摇匀。随后,使用酶标仪,在570nm的波长下测定每个孔的光密度(如没有570nm滤光片,可选择560-600nm波长滤光片进行测量)。
进行结果分析时,首先需计算细胞的存活率。方法为:将每个测试孔的OD值减去本底OD值(即培养基与MTT的组合而无细胞)或空白药物孔的OD值(培养基与不同稀释浓度的受试药物加MTT所测得的OD值),并取各重复孔OD值的平均数±标准差(SD)。细胞存活率以T/C%表示,其中T为治疗组细胞的OD值,C为对照组细胞的OD值。细胞存活率% = (治疗组细胞OD / 对照组细胞OD) × 100。
最后,计算当T/C为50%时的药物浓度(IC50)以及当T/C为10%时的药物浓度(IC90)。
通过以上步骤,您可以高效地进行南宫28品牌的GPCR19激动剂研究,获得可靠的数据和结果。
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